1. 开箱后拍照,检查干冰余量以及冻存管是否融化,核对细胞信息(冻存管置于干冰上方拍照核对即可,不要离开干冰),如有异常请第一时间联系销售人员或者技术支持
2. 若收到细胞当天不进行复苏,请及时将细胞转移至液氮罐中(注意转移过程动作要迅速,转移过程中细胞不要离开干冰,温度变化对冻存细胞影响较大)。
3. 若无液氮罐,请及时将细胞转移到-80C冰箱中保存(注意放在冰箱靠里的位置,储存温度的稳定性对复苏细胞的活率影响较大,若长期保存,应将细胞保存在液氮罐)
4. 复苏细胞时,请提前准备好适合细胞生长的培养基,若从冰箱拿出,需待培养基恢复室温后使用。
5. 复苏的细胞不建议当天或次日换液,部分细胞贴壁时间长(约48h)。
6. 细胞解冻过程要快,将冻存细胞从-80C冰箱或液氮罐取出后,需尽快置于37C水浴锅里,边解冻边摇晃,解冻时间1min以内为宜,最长不超过2min,化冻速度越快对细胞影响越小
7. 先复苏一管细胞到一个T25瓶或6cm培养皿中,复苏后可以取少量细胞
进行计数并检测细胞活率。
8. 解冻后的细胞,尽量不要在常温存放,需尽快加入含培养基的离心管内稀释DMSO。
9. 悬浮细胞复苏三天内不建议进行离心换液,应维持其稳定的培养环境,可选择补液或者半换液来补充营养,更有利于细胞恢复活力。
细胞复苏操作指南
1. 将水浴锅预热至37C,准备好干净的一次性手套(防止冻存管接触水导致污染);准备一支15 mL无菌离心管,加入9mL培养基,置于37C培养箱预热。
2. 将冻存管从-80C冰箱或液氮罐中取出,放入一次性手套中,迅速没入水浴锅,摇晃冻存管以加速细胞解冻,以1min内全部解冻为宜,不要超过2min,此过程越快越好。
3. 在超净台中将解冻完全的细胞液加入到装有9mL预热培养基的离心管内,1200rpm(约250-300g)离心3-5min,离心后弃上清。
4. 加入适量完全培养基重悬细胞,按需接入到无菌容器中(推荐一管细胞复苏到一个T25瓶或者6cm培养皿中),补充培养基到适宜的培养体积,放培养箱中培养。